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BCR-ABL 融合基因检测 那些事儿
人阅读 发布时间:2018-12-21 16:02
慢性粒细胞白血病(Chronic Myelocytic Leukemia,下文简称 CML),是一种影响血液及骨髓的恶性肿瘤,抑制骨髓正常造血,通过血液扩散全身,导致病人出现贫血、容易出血、感染以及器官浸润等病症。
监测 CML 疾病负荷的常规方法有三种:
那么为什么要检测 BCR-ABL 水平呢?
研究人员发现 CML 患者体内22号染色体更短,后续研究指出是因为这类患者体内9号染色体上的ABL基因会与22号染色体上的BCR发生里交换,形成BCR-ABL融合基因,该基因可转录出一个8.5kb的异常mRNA,最终翻译成210kD大小的蛋白质——P210,P210具有较强的酪氨酸蛋白激酶活性,可通过多种信号转导途径来活化原癌基因和某些细胞因子,导致细胞的恶性转化。Ps: >95% CML 病例为 P210「 b3a2/b2a2」(或称「e14a2/e13a2」,下图红框标记)型。
国际上如何利用 BCR-ABL 水平指导临床?
%IS:International Scale percent ratio
CF:转换因子(将一个特定的实验室中得到的 BCR-ABL 值与从一个中心参考实验室特定样本得到的一组 BCR-ABL 值进行比较,CF 值需要定期进行重新评估)
MR:Molecular log Reduction level
即通过检测 BCR-ABL 及 ABL 水平结合每个实验室的 CF 值来计算 %IS 值,然后通过%IS 值反应 MR 水平,最后借此指导临床治疗,调整治疗方案。下表中 MMR 意为主要分子学反应,是目前 CML 患者的重要治疗目标。
如何检测 BCR-ABL 水平?
提示:目前临床上检查 BCR-ABL 融合基因的金标准是 qPCR 技术,但由于 qPCR 技术的定量检测依赖标准的参考物质。此外 qPCR 技术的技术局限导致检测灵敏度不够高,对微小残留病无法实现有效监测。
那么有没有一种技术/一款试剂盒能够高灵敏度地对 BCR-ABL 融合基因进行准确定量呢?答案是有的,但目前在中国还没有进入临床应用阶段,且跟着小编往下看......
众所周知,Bio-Rad QX200 微滴式数字 PCR 技术(下文简称「ddPCR」)以分子计数的方式实现对靶标核酸分子的绝对定量。相对荧光定量 PCR 技术来说,ddPCR 技术不依赖于标准曲线,且灵敏度、重复性和准确性有很大提高。在癌症分子标志物发现、病毒载量分析、传染病研究、基因组结构变异及 NGS 文库定量方面都得到了广泛应用。
QXDx BCR-ABL %IS 试剂盒是 Bio-Rad 推出的基于 QX100/200 微滴式数字 PCR 平台的 BCR-ABL 融合基因定量检测试剂盒,灵敏度可达 MR4.7 或 MR5.0 水平。更值得一提的是该款试剂盒在 2017 年 12 月份获得了 CE-IVD认证,这也是第一个在欧洲获批的、针对血液样本的 BCR-ABL 定量检测试剂盒,目前也在申报美国 FDA 认证。
那么如何利用该试剂盒进行 BCR-ABL %IS 水平检测呢?
该试剂盒中除了反转录需要的试剂、引物、ddPCR 过程中需要引物探针外,还内置一系列 Control 及 Calibration 样本,确保检测结果的有效性、准确性。
Controls:高水平阳性对照 - MR0.3-MR1.0 (10%-50%IS)
低水平阳性对照 - MR3.0-MR5.0 (0.001-0.1%IS)
阴性对照 - < MR5.3 (0.0007%IS)
Calibrations: ~0.1%IS 和 ~10%IS
该试剂盒与 qPCR 结果一致性,灵敏度、特异性检测结果如下:
Bio-Rad 在生命科学发展的道路上不断开创,稳步前进,致力于提供更加先进的技术、更多创新的产品。
本产品在中国大陆仅限科研使用,不作为临床诊断。
Bio-Rad 是 Bio-Rad laboratories, Inc.在特定区域的商标。
参考文献:
[1] Jennings L.J, George D, Czech J, Yu M, Joseph L. Detection and Quantification of BCR-ABL1 Fusion Transcripts by Droplet Digital PCR. The Journal of Molecular Diagnostics. 2014 Mar;16(2):174-9.
[2] Cross N.C, White H.E etc. Development and evaluation of a secondary reference panel for BCR-ABL1 quantification on the International Scale. Leukemia. 2016 Sep;30(9):1844-52.
[3] Zagaria A, Anelli L, Coccaro N etc. BCR-ABL1 e6a2 transcript in chronic myeloid leukemia: biological features and molecular monitoring by droplet digital PCR. Virchows Arch. 2015 Sep;467(3):357-63
[4] Tang Y, Wei X, Chen J, Du Y, Chu H etc. Absolute quantification of BCR-ABL1 fusion transcripts in pediatric chronic myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2016 Sep;57(9):2216-8.
监测 CML 疾病负荷的常规方法有三种:
- 血液学反应(HR)-评估血细胞计数和分化
- 细胞遗传学反应(CyR)-骨髓细胞中期染色体带型分析
- 分子学反应(MR)- BCR-ABL 转录本水平相对于对照基因的检测
那么为什么要检测 BCR-ABL 水平呢?
研究人员发现 CML 患者体内22号染色体更短,后续研究指出是因为这类患者体内9号染色体上的ABL基因会与22号染色体上的BCR发生里交换,形成BCR-ABL融合基因,该基因可转录出一个8.5kb的异常mRNA,最终翻译成210kD大小的蛋白质——P210,P210具有较强的酪氨酸蛋白激酶活性,可通过多种信号转导途径来活化原癌基因和某些细胞因子,导致细胞的恶性转化。Ps: >95% CML 病例为 P210「 b3a2/b2a2」(或称「e14a2/e13a2」,下图红框标记)型。
国际上如何利用 BCR-ABL 水平指导临床?
%IS:International Scale percent ratio
CF:转换因子(将一个特定的实验室中得到的 BCR-ABL 值与从一个中心参考实验室特定样本得到的一组 BCR-ABL 值进行比较,CF 值需要定期进行重新评估)
MR:Molecular log Reduction level
即通过检测 BCR-ABL 及 ABL 水平结合每个实验室的 CF 值来计算 %IS 值,然后通过%IS 值反应 MR 水平,最后借此指导临床治疗,调整治疗方案。下表中 MMR 意为主要分子学反应,是目前 CML 患者的重要治疗目标。
如何检测 BCR-ABL 水平?
提示:目前临床上检查 BCR-ABL 融合基因的金标准是 qPCR 技术,但由于 qPCR 技术的定量检测依赖标准的参考物质。此外 qPCR 技术的技术局限导致检测灵敏度不够高,对微小残留病无法实现有效监测。
那么有没有一种技术/一款试剂盒能够高灵敏度地对 BCR-ABL 融合基因进行准确定量呢?答案是有的,但目前在中国还没有进入临床应用阶段,且跟着小编往下看......
众所周知,Bio-Rad QX200 微滴式数字 PCR 技术(下文简称「ddPCR」)以分子计数的方式实现对靶标核酸分子的绝对定量。相对荧光定量 PCR 技术来说,ddPCR 技术不依赖于标准曲线,且灵敏度、重复性和准确性有很大提高。在癌症分子标志物发现、病毒载量分析、传染病研究、基因组结构变异及 NGS 文库定量方面都得到了广泛应用。
QXDx BCR-ABL %IS 试剂盒是 Bio-Rad 推出的基于 QX100/200 微滴式数字 PCR 平台的 BCR-ABL 融合基因定量检测试剂盒,灵敏度可达 MR4.7 或 MR5.0 水平。更值得一提的是该款试剂盒在 2017 年 12 月份获得了 CE-IVD认证,这也是第一个在欧洲获批的、针对血液样本的 BCR-ABL 定量检测试剂盒,目前也在申报美国 FDA 认证。
那么如何利用该试剂盒进行 BCR-ABL %IS 水平检测呢?
该试剂盒中除了反转录需要的试剂、引物、ddPCR 过程中需要引物探针外,还内置一系列 Control 及 Calibration 样本,确保检测结果的有效性、准确性。
Controls:高水平阳性对照 - MR0.3-MR1.0 (10%-50%IS)
低水平阳性对照 - MR3.0-MR5.0 (0.001-0.1%IS)
阴性对照 - < MR5.3 (0.0007%IS)
Calibrations: ~0.1%IS 和 ~10%IS
该试剂盒与 qPCR 结果一致性,灵敏度、特异性检测结果如下:
Bio-Rad 在生命科学发展的道路上不断开创,稳步前进,致力于提供更加先进的技术、更多创新的产品。
本产品在中国大陆仅限科研使用,不作为临床诊断。
Bio-Rad 是 Bio-Rad laboratories, Inc.在特定区域的商标。
参考文献:
[1] Jennings L.J, George D, Czech J, Yu M, Joseph L. Detection and Quantification of BCR-ABL1 Fusion Transcripts by Droplet Digital PCR. The Journal of Molecular Diagnostics. 2014 Mar;16(2):174-9.
[2] Cross N.C, White H.E etc. Development and evaluation of a secondary reference panel for BCR-ABL1 quantification on the International Scale. Leukemia. 2016 Sep;30(9):1844-52.
[3] Zagaria A, Anelli L, Coccaro N etc. BCR-ABL1 e6a2 transcript in chronic myeloid leukemia: biological features and molecular monitoring by droplet digital PCR. Virchows Arch. 2015 Sep;467(3):357-63
[4] Tang Y, Wei X, Chen J, Du Y, Chu H etc. Absolute quantification of BCR-ABL1 fusion transcripts in pediatric chronic myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2016 Sep;57(9):2216-8.