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伯乐生命医学产品（上海）有限公司 Bio-Rad Laboratories品牌商
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伯乐生命医学产品（上海）有限公司 Bio-Rad Laboratories
入驻年限：14 年
- 联系人：
伯乐生命医学
- 所在地区：
上海 杨浦区
- 业务范围：
实验室仪器 / 设备、耗材、试剂
- 经营模式：
生产厂商
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公司新闻/正文
科研避坑指南——被高估的"管家蛋白"：你的实验数据可能已经失真
4984 人阅读发布时间：2025-08-18 14:27
"今天WB结果又飘了！"小李师弟盯着电脑发愁，处理完的条带灰度值趋势与预期完全不符。为完成这个实验，他已经忙碌了一周：处死小鼠、提取样品、定量、跑胶、转印、孵抗体、曝光，小鼠都杀了一箩筐。小李的项目是神经发育相关的疾病研究，在做Western实验前，他还特意查了文献，按照文献用β-actin做内参，却发现P15小鼠的Akt蛋白结果和预期完全相反——明明神经元成熟时Akt应该下调，数据却显示显著上升。
以β-actin为内参的Akt表达随小鼠发育，逐渐升高（趋势有误）。
以总蛋白为内参的Akt表达随小鼠发育，逐渐降低（趋势正确）。
新研究发现，小鼠皮层发育关键期（出生后10-15天），β-actin和β-tubulin骤降30-40%，而GAPDH蛋白则激增100%。这些被奉为"管家"的蛋白，在神经发育的狂风巨浪中自身难保，如何能作为稳定的锚点？
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β-actin/β-tubulin：从"基建狂魔"到"维稳管家"，P10后表达断崖式下跌，与神经元迁移高峰期（P0-P5）的需求形成鲜明对比。
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GAPDH：能量引擎在P10-P15突然提速（RNA同步上调1.6倍），与皮层髓鞘化、突触爆发的高能耗期完美重合。
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全皮层匀浆数据掩盖了细胞类型剧变：P0时神经元占80%，成年后胶质细胞激增3倍。β-tubulin亚型Tubb2a/P25的27倍跌幅，正是少突胶质细胞重塑微管网络的印记。单一内参无法捕捉这种"细胞合唱"的变化。
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替代方案：Total Protein总蛋白内参归一化，如丽春红、考马斯蓝、Stain-Free免染
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技术革新：Stain-Free免染总蛋白技术，通过紫外激发凝胶中的蛋白与预制染料结合，直接可视化胶及膜上总蛋白，CV<10%的稳定性秒杀传统内参。并且不需要染色、脱色操作
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操作指南：正常上样，在凝胶或膜上选取全泳道蛋白条带灰度值，彻底摆脱"单蛋白依赖"
每次实验附总蛋白泳道CV值（<10%为合格）
跨发育阶段实验必须做内参稳定性预实验，如果不行就果断转总蛋白内参
引用ENCODE转录组数据（GEO: ENCSR561OFW）交叉验证
（本文数据来自《Developmental Neuroscience》2025年研究论文，DOI:10.1159/000544064）
如果您需要进一步了解Stain-Free免染总蛋白技术或者申请相关试用，可在线咨询与我们进行联系。