两个月前投的一篇 20 分以上的大文章终于有了回音，补充一些 Western 数据，说明目的蛋白的表达差异就可以接收了。组会上老板难掩兴奋，却又严肃的下达了死命令：「务必一个月内搞定补充数据，保证文章能够不再修回，直接接收！」想着自己辛苦两年，终于有望成为大文章一作了，满心欢喜的开始了数据补充实验，本身 Western 实验也不难，应该轻松完成老板的任务。
 

然而，我这边一切都已准备就绪的时候，师弟负责的蛋白胶居然跑了 1 多个礼拜还拿不到想要的电泳图！要么蛋白有杂带、要么条带歪歪扭扭，甚至最近做烦了连制胶都出现漏液甚至凝固不好……
 

老板这周组会问到修回文章的补充实验怎么样了，我甚至都不敢说。老师，胶没跑好。这么简单的实验，如果条带和数据不漂亮，难免要被审稿人挑战甚至拒稿！
 

关键时刻，隔壁实验室号称「Western 老法师」的师兄终于出手相救了！在他的指导下，我和师弟两天就跑出了漂亮的 Western 结果，恨不得包他一个月的食堂伙食！老法师的经验到底怎么样，他怎么出手挽救了我的实验？接下来，就跟大家分享一下。

 

1. 制胶前玻璃板一定要洗净、晾干

高质量的玻璃板通常表面都有涂层，防止电泳过程中蛋白条带的吸附，但是玻璃板洗刷次数太多，有可能会造成涂层磨损，或者玻璃板表面磨花。这次「老法师」就拿出了他全新的正品玻璃板，确保我的实验万无一失。另外，玻璃板如果没有晾干，残留的水分就会影响凝胶的聚合及均一性，条带难免变形。
 

2. 梳子要和玻璃板配套使用

实验里通常有很多不同品牌的玻璃板和梳子，经常混用。但是，不同品牌的梳子及玻璃板厚度也有略微差异，如果厚度不匹配，也会造成上样孔变形，或者漏胶。这次老法师也是贡献出了他配套的塑料梳子，确保我的制胶过程不出问题。
 

3. 确保样品缓冲液离子强度正确

样品中的盐离子强度过高（或过低），都会导致条带出现偏斜或扭曲。由于我的样品特殊，蛋白提取过程使用高盐溶液，所以老法师建议我先把样品做脱盐和溶液置换，再加上样缓冲液。

4. 避免过载上样

为了能看到更亮的目标蛋白，我之前实验的上样量都很大，上 40 ug 总蛋白。但是，老法师告诉我过大的上样量会导致电泳过程中出现垂直条纹，而且会影响转印效率。其实我的蛋白表达量比较高，他建议我直接把上样量减半，反而会跑出了更 sharp 的条带，条带曝光依然很亮。
 

5. 加样前吹净上样孔

在加样之前，用移液枪从上缓冲液室吹洗每个上样孔。这有助于洗净残留在上样孔中的聚丙烯酰胺残渣，避免畸形条带的出现。老法师亲自出手，演示如何吹净上样孔里的凝胶残渣。


 

6. 电泳过程避免凝胶过热

如果凝胶在电泳过程中温度过高，则条带可能会出现「微笑」形状，即条带两侧向上弯曲的现象。如果缓冲液使用不当，或电泳功率过高，都可能导致凝胶过热。老法师搬来了他实验室里某大牌电泳仪，保证精准控制电压。他还亲自演示如何先低电压跑浓缩胶，再高电压跑分离胶。还有这种操作！把我看傻了！



分享完以上实验小技巧后，这里我也想给大家透露一下老法师借给我用的玻璃板和梳子的品牌，那就是人尽皆知的 Bio-Rad！产品虽然好，但是贵啊！不是所有的实验室都能买得起啊。



*Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Ins 在特定区域的商标。
*相关产品仅可用于科研，不可作临床诊断使用。