蛋白纯化是很多人的心头病。纯化蛋白时选择什么纯化条件，纯化方式对于刚到实验室的我是个大难题。花了不少时间，但是一直没有个好的结果，这次又被导师说了：




作为生物医药研究领域的工作者，我们的实验通常会涉及生物分子如蛋白、多肽以及核酸的纯化，以用于进一步的性质分析、功能评价等实验。但生物分子的层析纯化条件摸索是一个恼人的工作，不同的 pH 条件，不同的缓冲液体系，不同的纯化方式等有几十种甚至上百种组合。到底哪一种条件和纯化方式适合你的样品？很难用简单的几个实验得出结论。这种寻寻觅觅而不得的感觉成为了无数纯化工作者的伤心之处。怎么样能够快速的获得高纯度高得率目标蛋白的工艺路线呢？怎么样能够避免走弯路快速直达成功的彼岸呢？我们总结整理了蛋白纯化条件摸索过程的以下三个核心点：

要点一：条件摸索程序自动化
 

以蛋白纯化过程为例，通常蛋白层析纯化条件优化时需要对不同种类的层析柱，洗脱的 pH 以及洗脱液浓度进行筛选和对比。传统上，都是逐个条件逐个条件的去筛选，每个实验都要单独的运行一次系统，配置一批溶液，调整数次洗脱液。这种工作枯燥，繁琐且容易出错。如果能够多个条件的实验同时进行或者做到纯化体系的自动化筛选那么将极大减少工作量。

NGC Scout 就是为了解决这个问题而设计的，它可以一次性进行多个实验的连续运行，在基础型号上可以就 pH、流速、以及洗脱液浓度进行自动化筛选。升级版以及 NGC Discover 可以对包括不同来源的层析进行自动化筛选，整个过程简单快速。配合 ChromLab 的强大分析功能，更能快速地获得优化的实验条件和工艺路线。
 

图 1. NGC Scout 条件筛选系统和 ChromLab 软件
 

要点二：纯化方式的筛选
 

另外对于蛋白纯化过程来说核心点之一就是纯化方式的选择，根据蛋白性质可以选择亲和层析，离子交换层析，疏水层析等方式。不同的纯化方式就要用到不同的层析柱。关于层析柱的选择，可以来源于不同制造商，也可能是不同的材质系列。但是有没有更加简单的方法呢？Bio-Rad 推出了 EconoFit 层析柱和层析柱筛选试剂盒，Econfit 是全新一代即用型预装柱，即买即用，包含多种填料选择。更好的是，针对于工艺开发，还推出包括 CHT、阳离子交换、阴离子交换等实验类型设计的筛选柱包。在 Scout 自动化系统运行下，让您的实验真正获得加速。

图 2. EconoFit 层析柱

表 1. EconoFit 筛选试剂盒选择表

要点三：快速的纯化效果评价和比对
 

一旦利用特定条件开始纯化蛋白后，就要想好如何去评价拿到的蛋白质量和不同条件的纯化效果。众所周知，蛋白层析的层析图实际上并不能作为判定纯化效果的唯/一指标。通常，需要凝胶电泳的结果进行最终判断。传统的凝胶电泳往往在 2 个小时以上，耽误了大量的时间，使整个工作变得漫长。使用 Criterion TGX Stain-Free Precast Gels 免染预制胶，可以使我们能够在 30 分钟内获得结果并对实验方法进行评价，这样，限制纯化工艺路线确定的最后一个瓶颈就解决了。

图 3. Stain Free 预制胶快速分析纯化组分成分

Bio-Rad 蛋白工艺优化的三种武器针对条件摸索的关键点，可以帮助客户快速地提高工作效率，获得稳定的结果。无论是实验室难于纯化蛋白的纯化方法探索，还是工艺开发中对于产率、回收率的寻找，都能提供强有力的帮助。工欲善其事必先利其器! 是时候更新装备，让您的实验简单起来了！

*Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Ins 在特定区域的商标。

*相关产品仅可用于科研，不可作临床诊断使用。