WB 一个月都没出结果，你的步骤错在哪里？（文内干货）

大清早伴着实验室的哀叹，小师妹肝了一个月的 WB 实验又双叒叕失败了。

投稿的杂志要求上传 WB 原图，且对 WB 图片质量要求极高。看着空白一片、乌七八黑、歪歪扭扭的 WB 结果图，真是令人头秃……

此时，大师兄指出一条明路：要关注 WB 实验中的电泳和转印过程！

令人头秃的结果图（图源：用户提供）
 

Western Blot 实验作为生物医药研究领域的常客，却是罕见的「玄学」操作，向来是易做难精、难出漂亮图。每一个生物科研狗，都有着一本厚如板砖的 WB 操作血泪史。即使从蛋白制样开始，每个环节都小心谨慎，最后显影环节也可能是一场空。尤其是其中的电泳和转印过程，看起来简单朴实，但是却很容易出现问题。

尽管 WB 实验这么玄乎，但是很多坑也是可以规避的。电泳和转印，这两步操作是后续环节的基础。顺利高效地完成它们，你的 WB 实验将事半功倍！下面为大家整理了这两步的注意事项，需要的同学可以截图保存，后面就不要出错了。
 

电泳的注意事项

1. 选择合适的制胶装置：当凝胶和玻璃挡板底部有气泡或两边聚合不完全时，跑出条带常呈「皱眉状」。

2. 选择精确的电源系统：当你的条带呈「笑脸状」时，你的内心却是 emo 的。电泳系统温度高，且电场强度过大时，会导致条带弯曲。

3. 设置合理的电压：小电压能够使胶的分子筛效应充分发挥，在某些实验体系中，电压越小，条带跑得越漂亮。浓缩胶和分离胶分别跑 55V 和 75V，即使花费时间长，得到的条带却会让你觉得人间值得！

4. 控制上样量：上样量过多，将会导致其弥散至孔周围。在电泳时将造成条带两边扩散，建议减少上样量或者使用 5X 上样缓冲液。
 

转印的注意事项

1. 防止转膜液过热：发热造成胶变形、分子扩散。在转膜前将转膜缓冲液提前置于 4℃ 冷却，将转膜装置放在冰浴或 4℃ 冰箱里进行转印。

2. 赶走气泡：转膜后胶上有单个或多个白点，造成转膜效果差，这是因为膜和胶间存在气泡。制作三明治时应充分赶走气泡，以免影响后续转膜。

3. 充分转膜：当膜没有完全均匀湿透、靶蛋白分子量较小、转膜 buffer 中甲醇含量过高及转膜时间短时，均能造成转膜不充分。此时应分别增加浸泡活化的时间、选择小孔径的膜、降低甲醇浓度及延长转膜时间，以达到充分转膜的效果。
 

获得一张漂亮、发表级的 WB 图并不容易，每个实验室和科研工作者也有自己独特的 tips。

除了在实验步骤上多下功夫，一款好用的 WB 电泳仪也尤为关键，能够助力 WB 实验高效进行。Bio-Rad 的电泳产品，助力你的 WB 实验图瞬间俘获审稿人的芳心，让你按时毕业，不头秃！

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*相关产品仅可用于科研，不可作临床诊断使用。