脆性X综合征海马体功能障碍

脆性X综合征（FXS）是导致儿童智力障碍的主要单基因原因，目前尚无治愈方法。来自加拿大的研究者在《Hippocampus》上发文使用Fmr1基因敲除（KO）小鼠模型来研究FXS海马体功能障碍。海马体发育中的嘌呤能信号传导，其中ATP及其代谢物用作信号分子，但尚不清楚在Fmr1 KO发育中的海马体中嘌呤能信号是否受到影响（参考文献1）。

研究者首先发现P2X7在Fmr1 KO整个海马体组织中在P14和P21时期表达减少，这对应于海马体中神经元生长和突触精细化的时期。接着，研究者通过免疫荧光评估了P2X7的细胞特异性表达，并发现在P2X7与海马体小胶质细胞和神经元的共定位方面，野生型（WT）和Fmr1 KO小鼠之间存在差异。P2X7在P14和P21更多地与小胶质细胞共定位，但在神经元中P2X7的共定位在性别上呈现特异性减少。相比之下，雄性小鼠在P14和P21显示出与雌性相比，神经元P2X7共定位减少，但只有雌性显示出背侧海马体形成中神经元P2X7表达的绝对减少。总的来说，研究结果表明P2X7的表达在Fmr1 KO海马体发育过程中发生变化，可能影响Fmr1 KO海马体形成中的几个发育过程。

海马体中P2X7的表达，Western Blot数据使用Stain-Free免染总蛋白作为内参，进行归一化定量。

通过Western Blot实验确认，P2X7的表达在Fmr1 KO海马体发育过程中发生变化，并在特定发育阶段表达减少，这可能影响海马体的形成和功能。研究者还通过免疫荧光技术评估P2X7在不同细胞类型中的表达，发现与WT小鼠相比，Fmr1 KO小鼠中P2X7与小胶质细胞和神经元的共定位存在差异。此外，还观察到P2X7在神经元中的共定位在雄性和雌性小鼠之间存在性别差异。

作为研究实验的关键部分，Western Blot数据提供了P2X7在海马体中的表达变化的直接证据。可能是由于传统管家蛋白有可能会在神经发育过程中产生不稳定的变化，研究人员改用Stain-Free获得的总蛋白作为WB归一化内参，保证了数据的精准可靠。

Stain-Free技术通过UV检测预染色的凝胶，实现了对总蛋白量的直接和定量评估。这种方法不仅适用于传统的Western Blot分析，还能够在多种实验条件下提供准确的蛋白加载控制。随着Stain-Free技术在神经科学研究中的推广，以及对传统看家蛋白的质疑日益增加，它有望成为新的标准操作程序，为神经科学研究提供更可靠的数据支持。

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1.P2X7 expression patterns in the developing Fmr1-knockout mouse hippocampus. Hippocampus. September 2024