在细胞外囊泡（EV）的鉴定中，Western Blot方法几乎是必做的项目。而在细胞外囊泡（EV）的WB实验中，通常会选择特异性标志物如CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等中的2-3个作为检测靶标。

 

 

令很多细胞外囊泡（EV）研究者头秃的是：WB实验中的内参怎么选？到底是否需要选择内参？有些同行可能会给你支招：

1.WB细胞外囊泡（EV）表征是定性实验，不需要内参……

 

2.可以用细胞外囊泡（EV）的计数来代表上样量，没有内参也可以！

但是，没有内参条带，期刊不接受怎么办？这个风险太大了。

 

在部分已发表的文章中，一些研究者确实使用了Actin、Tubulin作为内参。而从结果来看，细胞外囊泡（EV）中的Actin和Tubulin的表达丰度相对于正常细胞样品偏低，WB实验可能会检测不到条带或者条带微弱。

 

来自加拿大麦吉尔大学的研究者使用了Bio-Rad Stain-Free免染总蛋白作为细胞外囊泡（EV）WB表征的内参，有效避免了常规看家蛋白内参条带弱或无条带的问题，同时也很好的反映了泳道的上样情况（参考文献1）。下图中的左边是使用Stain-Free免染总蛋白内参图像，右边是各个细胞外囊泡（EV）标志物的WB条带结果。各泳道的样品分别为，LD：分子量marker；F1：体积排阻色谱收集组份1；F2：体积排阻色谱收集组份2；WB：全脑匀浆；PC：胶原酶均质沉淀。

 

Stain-Free免染总蛋白及细胞外囊泡（EV）标志物WB结果

（图源：doi.org/10.1093/ijnp/pyae013）

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